山药多糖关节腔注射对兔膝关节骨性关节炎炎症因子及关节软骨代谢的影响

目的 探讨山药多糖关节腔注射对兔膝关节骨性关节炎模型软骨退变的保护机制及抑制炎症因子表达水平的影响,为山药多糖的开发及研究提供相关证据,同时为进一步研究奠定基础。方法 将55只新西兰白兔,用随机数字表法分为5组,每组11只,采用改良Hulth法制备膝关节骨性关节炎兔模型,分别为模型组、山药多糖低、中、高剂量（0.7,1.43,2.15 mg·kg^-1）组、玻璃酸钠（1.00 mg·kg^-1）组。造模成功1周后模型组不干预治疗,各组使用相应药物干预5周,1次/周。5周后通过肉眼观察关节大体标本,光镜下观察关节软骨组织苏木素-伊红（HE）染色和甲苯胺蓝（TB）染色病理切片及评分,使用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测兔膝关节液白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平,采用免疫组化法检测关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）,转化生长因子-β₁（TGF-β₁）,Ⅱ型胶原（Col-Ⅱ）的表达。结果 山药多糖干预5周后,与模型组比较,山药多糖各组关节液中IL-6,IL-1β,TNF-α的含量均明显降低（P<0.05）,关节软骨中MMP-13的表达水平均也明显低于模型组（P<0.05）,而TGF-β₁和Col-Ⅱ的含量明显升高（P<0.05）;与山药多糖低、高剂量组比较,山药多糖中剂量组兔膝关节炎症因子IL-6,IL-1β,TNF-α含量明显降低（P<0.05）,软骨组织中TGF-β₁和Col-Ⅱ的含量明显升高（P<0.05）,MMP-13的含量明显降低（P<0.05）。与玻璃酸钠组比较,山药多糖中剂量组兔膝关节炎症因子IL-6,IL-1β,TNF-α含量,软骨组织中TGF-β₁,Col-Ⅱ和MMP-13含量差异无统计学意义。结论 山药多糖关节腔注射可明显降低兔膝关节液中IL-6,IL-1β,TNF-α的表达,并能有效抑制关节软骨中MMP-13表达,使关节软骨胶原的降解得到抑制,促进TGF-β₁,Col-Ⅱ的合成,对关节软骨起到保护及修复作用,从而延缓关节软骨的退变。     

大黄产业化过程废弃物的资源价值发现与利用探讨

中药废弃物的循环再利用是当前中药资源产业化过程中亟待解决的重要研究课题。大黄作为我国传统大宗中药材,主要来源于掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄。目前,3种大黄均已实现规模化栽培,广泛应用于医药、保健、食品、化妆品和兽药等领域,年需求量达5 500余吨（1吨=1 000 kg）。然而,在生产及深加工过程中产生的大量非药用部位和药渣等废弃物,因无有效利用途径而废弃,造成了严重的资源浪费和环境污染。大黄非药用部位有类似于根及根茎的化学成分和药理作用,还富含多种氨基酸、矿物质元素和常规营养成分,且使用历史悠久,某些资源性成分含量较根及根茎高,尤其是大黄茎叶安全性高、药食用价值潜力巨大;大黄药渣蒽醌类成分含量较高,具良好的抗菌活性。可见,大黄产业化过程废弃物具有较高的利用价值。鉴于此,笔者在查阅国内外相关文献和产地应用调研的基础上,对大黄药用部位和非药用部位的利用状况进行总结,对其产业化过程废弃物的产生及其资源性物质和利用途径进行综述,并提出大黄废弃物多层次和多途径的资源化利用策略,以期为大黄资源的合理开发和应用提供参考,促进大黄废弃物的有效利用和绿色发展。     

金钱草不同溶剂提取物对雷公藤毒性抑制作用的比较

目的 考察金钱草不同提取物对雷公藤主要毒性肝损伤的减毒作用,优选提取溶剂。方法 将90只雄性SPF级昆明种小鼠按体质量随机分为9组,即正常组、金钱草水提物组、金钱草30%乙醇提取物组、雷公藤组、雷公藤配伍金钱草水提取物组、雷公藤配伍金钱草30%乙醇提取物组、雷公藤配伍金钱草60%乙醇提取物组、雷公藤配伍金钱草95%乙醇提取物组、雷公藤配伍金钱草乙酸乙酯提取物组,其中雷公藤与金钱草的剂量均按生药计分别为2,1 g·kg^-1,正常组给予等体积的溶媒,各组均采用灌胃给予,连续14 d,末次给药24 h取血和肝组织,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠血清生化指标及肝脂质过氧化/抗氧化指标,同时借助主成分分析方法整体评价金钱草提取物对雷公藤肝损伤的减毒作用及其作用机制。结果 与正常组比较,雷公藤组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天冬氨酸氨基转移酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）,肝丙二醛（MDA）水平,以及由以上4个指标降维产生的肝损伤综合得分（Z值）均显著升高（P<0.01）,肝抗氧化指标总超氧化物歧化酶（T-SOD）,谷胱甘肽-过氧化物酶（GPX）,谷胱甘肽-S转移酶（GST）水平均显著降低（P<0.01）;与雷公藤组比较,分别给予金钱草2种溶剂（水,30%乙醇）提取物干预后,血清ALT,AST,ALP及肝MDA水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）,肝T-SOD,GPX,GST水平显著升高（P<0.01）,给予金钱草2种溶剂（60%乙醇,95%乙醇）提取物干预后,血清ALT,AST,ALP水平均显著降低（P<0.01）,肝GPX水平显著升高（P<0.01）,给予金钱草乙酸乙酯提取物干预后,仅能明显降低血清AST水平（P<0.05）,显著升高肝GPX水平（P<0.05）;而给予金钱草不同溶剂（水,30%乙醇,60%乙醇,95%乙醇,乙酸乙酯）提取物干预后均能显著降低肝损伤综合得分（P<0.01）。结论 金钱草不同溶剂（水,30%乙醇,60%乙醇,95%乙醇,乙酸乙酯）提取物均可不同程度逆转雷公藤引起的肝损伤,其中以水和30%乙醇作为溶剂时的减毒作用为优,尤以水作为提取溶剂为更佳,且随着提取溶剂乙醇含量的升高或脂溶性的增强,肝损伤呈下降趋势。     

黄连对高脂饮食诱导肥胖小鼠胰岛保护作用的实验研究

目的:观察黄连对高脂饮食诱导的肥胖小鼠胰岛的保护作用。方法:采用C57BL/6小鼠,高脂饮食建立肥胖模型。随机分成模型组,黄连组,另设正常对照组,每组7只。黄连组给予黄连水煎剂灌胃4周,实验末,检测空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(INS)。HE染色对胰腺组织进行病理学观察,免疫组织化学检测胰岛insulin蛋白表达。结果:与模型组比较,黄连组FBG、INS显著降低,与正常组相比没有差异;HE染色观察发现模型组较正常对照组胰岛数量增多,体积显著增大,黄连组与模型组相比胰岛数量减少,体积明显缩小,未见明显的毛细血管扩张充血;免疫组织化学法检测发现黄连组与模型组相比胰岛insulin蛋白表达明显减少。结论:黄连对高脂饮食诱导的肥胖小鼠胰岛有一定的保护作用。     

人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用

目的:观察人参-三七-川芎提取物对延缓内皮微粒(EMPs)诱导的血管内皮细胞衰老的影响,并探索其作用机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,复制性衰老10~12代细胞作为衰老模型,实验分为年轻组(2~4代细胞)、衰老组(10~12代细胞)、单纯EMPs干预组(提取衰老细胞产生的EMPs来干预年轻细胞)以及中药低、中、高剂量组(200,300,400 mg·L-1)。结合衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期来判断细胞衰老程度。采用细胞活性和细胞增殖检测(CCK-8)法筛选给药浓度,两步离心法分离出EMPs,藻红蛋白(PE)CD31抗体或异硫氰酸荧光素(FITC)Annexin V标记分离得到的EMPs,并用流式细胞术进行定量,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与衰老组比较,中药给药组可显著降低衰老细胞SA-β-gal活性(P<0.01),使细胞周期S期阻滞得到恢复(P<0.01),并降低衰老细胞分泌CD31+EMPs及Annexin V+EMPs的数量(P<0.05)。与年轻组比较,单纯EMPs干预组可诱导年轻细胞SA-β-gal活性增强(P<0.01),细胞周期阻滞于S期(P<0.05),与衰老组比较,但在EMPs干预的同时给予中药干预后,可明显抑制EMPs介导增强的SA-β-gal活性(P<0.05),并使S期阻滞得到恢复。中药组还可明显抑制EMPs诱导的细胞内ROS增高(P<0.05,P<0.01)。结论:人参-三七-川芎提取物可通过影响EMPs延缓复制性血管内皮细胞衰老,其机制可能与抑制EMPs诱导的细胞内ROS水平增高有关。     

川芎地上部位的质量评价

目的:基于指纹图谱和含量测定对川芎地上部位(茎叶)进行质量评价。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速:1.0mL/min,进样量20μL,柱温35℃,检测波长254nm,建立HPLC指纹图谱;采用Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以水(A)-甲醇(B)(34∶66)为流动相,等度洗脱,流速:1.0mL/min,进样量10μL,柱温35℃,330nm和237nm双波长测定藁本内酯和丁烯基苯酞的含量。结果:建立了13批川芎地上部位的HPLC指纹图谱,标定了20个共有峰,指纹图谱相似度在0.89以上;13批样品中藁本内酯和丁烯基苯酞的含量分别为0.0642%~0.2633%和0.0057%~0.0325%。结论:该方法操作简便,结果准确,重现性好,可以为川芎地上部位的质量评价和质量控制提供参考。     

复方阿胶浆质量标准提升研究

目的提升复方阿胶浆质量标准。方法基于中药复方制剂"整体鉴别"新模式,对复方阿胶浆中植物来源中药采用一板多鉴法,红参、党参使用同一供试品溶液、同一展开剂,采用对照品和对照药材双对照(红参使用人参皂苷Rg_1对照品和红参对照药材;党参使用党参炔苷对照品和党参对照药材)进行鉴别;熟地黄、山楂使用2种供试品溶液、同一展开剂,采用对照品和对照药材双对照(熟地黄使用毛蕊花糖苷对照品和熟地黄对照药材;山楂使用牡荆素鼠李糖苷对照品和山楂对照药材)进行鉴别。对复方阿胶浆中动物药阿胶建立L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸4种氨基酸含量测定。并采用一测多评法,以L-羟脯氨酸为内标,确定甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的相对校正因子并计算含量。结果建立了复方阿胶浆中植物药鉴别的"4-3-2-2"模式,即4味中药,3种供试品溶液制备方法、2种展开剂,2种对照物的双对照方法,斑点清晰且专属性强。建立了复方阿胶浆中动物药阿胶一测多评法含量测定,15批样品中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的质量浓度分别为2.73～3.37、4.61～6.99、2.64～3.97、3.58～4.46 mg/mL。以L-羟脯氨酸为内标建立的甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的相对校正因子分别为0.651、0.958、0.857。采用t检验、相对偏差法和Pearson相关系数法对2种方法的含量测定结果进行比较分析,15批复方阿胶浆一测多评法计算值与外标法实测含量值无显著差异。结论建立了复方阿胶浆中植物药来源中药鉴别的"4-3-2-2"模式。对处方中动物来源中药阿胶建立了4种氨基酸的一测多评法含量测定。通过"一板、一测",达到"多鉴、多评"整体药味质量控制的目的,科学合理地提升复方阿胶浆的质量标准。     

大黄及其蒽醌对自身免疫性疾病治疗的研究进展

大黄始载于《神农本草经》,药理活性广泛。自身免疫性疾病是一类因机体免疫耐受功能受损而致免疫细胞及其成分对自身组织结构和功能破坏的疾病,包括动脉粥样硬化、多发性硬化、痛风、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺炎、溃疡性结肠炎、1型糖尿病、IgA肾病等。近年临床和实验研究显示,大黄及其蒽醌类成分对自身免疫性疾病具有良好的治疗潜力和开发前景。该文以中医药理论为指导,综述了大黄及其主要活性成分蒽醌对自身免疫性疾病的治疗和干预作用并对其作用机制进行解析,还针对大黄及其蒽醌目前研究存在的问题提出见解,旨在为大黄及其蒽醌在自身免疫性疾病的临床治疗和科学研究方面提供参考。     

基于真实世界的高血压住院患者临床特征及中药处方用药分析

目的研究真实世界中高血压病住院患者的临床特征以及各中医证型分布特点及中药处方用药规律。方法基于回顾性研究的方法,选择本院2018年1月—2019年12月信息系统(hospital information systerm,HIS)中主诊断为高血压的住院患者,采集其入院及治疗过程中的信息,使用频数分析和关联规则分析方法进行分析。结果共纳入2064例高血压患者,其中男性1007人(49%),女性1057人(51%);以3级高血压最多见(54%);证型分布上以痰瘀互结最多见(47%);各证型发病的平均年龄以肝火亢盛年龄最低(58岁),肾气虚证型最高(68岁)。高血压第2诊断常见合并病/症以冠心病为主(40%),其次为脑梗死(20%);住院时间的节气分布方面,总体上看以小满发病人数最多,其次是立夏、处暑、芒种、小暑等,各证型又不相同。中药使用方面:处方中共包括了235种中药材,各个证型高频用药以川芎使用的频次最高,其他使用频次较多的包括天麻、当归、半夏、丹参等。5个证型共计产生核心药对44对,肝火亢盛证以天麻配伍川牛膝、杜仲置信度最高;肾气虚证以川芎配伍山药、当归置信度最高;痰瘀互结证以川芎配伍当归、地龙置信度最高;阴虚阳亢证以川芎配伍半夏、酸枣仁置信度最高。结论基于临床特征及处方用药分析,高血压的基本病理因素以瘀、痰、虚为主,用药主要为活血通络、平肝补肾之品,常用核心药物为川芎,根据不同证型常以天麻、山药、当归、半夏等与之相配伍应用。     

基于高通量测序和化学轮廓分析研究黄连在连栀矾溶液发酵炮制中的作用

目的探究黄连Coptidis Rhizoma在连栀矾溶液传统发酵炮制中的作用。方法按照连栀矾溶液传统配方比例,将其拆分为3组配方溶液:连栀矾组(黄连+栀子+白矾)、黄连组(黄连+白矾)和栀子组(栀子+白矾),采用HPLC分析比较3组溶液发酵前后的化学成分变化轮廓,采用Illumina Hiseq高通量测序技术测定并比较发酵溶液中微生物的群落特征。结果传统配方连栀矾经发酵后环烯醚萜类成分发生了较显著的变化(P<0.05),生物碱类成分未发生明显变化,拆分后的黄连组中生物碱类成分和栀子组中环烯醚萜类成分均没有发生明显变化。分别对各组发酵溶液进行测序,根据α多样性分析结果,3组发酵液中真菌多样性为连栀矾组<栀子组<黄连组,真菌的丰富度为栀子组<连栀矾组<黄连组;细菌多样性为连栀矾组<黄连组<栀子组,细菌的丰富度为连栀矾组<栀子组<黄连组。根据β多样性分析结果,3组溶液中的真菌和细菌的群落结构均有明显差异。根据微生物相对丰度分析可知,3组的优势真菌均为子囊菌门、担子菌门和罗兹菌门,不同组间丰度无明显差异;真菌优势属中的孢霉属的丰度在连栀矾组最高,显著高于另外2组(P<0.05),栀子组又显著高于黄连组(P<0.05);韦斯特壳属的丰度在连栀矾组中最低,显著低于黄连组和栀子组(P<0.05),后两者间丰度无明显差异。3组的优势细菌均为变形菌门、厚壁菌门、放线菌门和拟杆菌门,其中连栀矾组中变形菌门的丰度极显著低于黄连组和栀子组(P<0.01),厚壁菌门的丰度在连栀矾组中极显著高于黄连组和栀子组(P<0.01),放线菌门和拟杆菌门的丰度在3组发酵溶液的差异较小;细菌优势菌属中的乳杆菌属在连栀矾组中显著高于黄连组和栀子组(P<0.05),在黄连组中也显著高于栀子组(P<0.05),伯克氏菌属丰度在黄连组和栀子组中无显著差异,都显著高于连栀矾组中的丰度(P<0.05)。结论连栀矾溶液配方中的黄连能提高其中栀子的有效成分的发酵转化,并且是通过对发酵体系中的优势菌属的丰度进行调节而发挥作用的。进一步佐证了传统配方制剂的合理性和科学性。